【実験プロトコール】レンチウイルスベクターの作製方法 - こりんの基礎医学研究日記 – Pickup - だめぽアンテナ

• プロトコールとＱ＆Ａ | 遺伝子材料開発室 (RIKEN BRC)
• 【実験プロトコール】レンチウイルスベクターの作製方法 - こりんの基礎医学研究日記
• RNAi実験の基礎　shRNA レンチウイルスによるノックダウン | M-hub（エムハブ）
• 組換えレンチウイルスを用いた標的細胞への遺伝子導入（トランスダクション）例：Protocols｜タカラバイオ株式会社
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プロトコールとＱ＆Ａ | 遺伝子材料開発室 (Riken Brc)

今回も実験 プロトコール です。 この目的は、自分の頭の整理・知識の確認の他に、いわゆる「おばあちゃんの知恵袋」的な、文献や教科書に載っていないけど知ってるとちょっと役立つようなことを記録しておくことです。 正確性には注意を払っておりますが、利用の際はご注意ください。 レンチウイルス関連の記事は以下の通り↓ レンチウイルスベクターの保存方法【短期保存】 - こりんの基礎医学研究日記 レンチウイルスベクターの保存方法 - こりんの基礎医学研究日記 【実験プロトコール】ウイルスタイターチェック - こりんの基礎医学研究日記 以下の プロトコール をもとに、ラボの先輩に教えてもらった方法です↓ 直径10㎝ディッシュを用意し、Poly-L-Lysineコーティングする。 ※Poly-L-Lysine(PLL)とは? 細胞膜上の陰イオンと培養容器表面上の 陽イオン との間の相互作用を促進する。つまりプラスチックやガラス面への細胞接着を促進する効果がある。 →省略してもあまり実験に影響ない印象 <やり方> 0.

【実験プロトコール】レンチウイルスベクターの作製方法 - こりんの基礎医学研究日記

トランジェント(一過性発現)で実験する場合 細胞を回収してqRT-PCRなどでノックダウン効率を検証する。 B. ステーブル(安定発現)で実験する場合 培地を適当量の ピューロマイシン を含む培地に交換する。細胞により至適濃度は異なりますが、1~10 μg/mLが標準的。 <5日目以降(ステーブルの場合のみ)> 3~4日ごとに培地を適当量の ピューロマイシン を含む培地に交換する。(一般的に10 ~ 12日後くらいでクローンが確立)。 5クローン以上をピックしてノックダウン効果を検証する。 以上、shRNAレンチウイルスによるノックダウンプロトコールを紹介しました。このように数日間にわたって実験を行う場合は、失敗して貴重な時間とサンプルを無駄にしないためにも、事前に手順を頭に入れ、しっかりと準備を整えてから行いましょう。 <無料PDFダウンロード> MISSION ® RNAi 総合カタログ このカタログではRNAiの原理やプロトコル、使用する製品についてご紹介しています。 ▼こんな方にオススメ ・RNAiの基礎を学びたい方 ・これからRNAi実験に取り掛かる予定の方 ・MISSION RNAi製品ならではの特長を知りたい方 無料PDF(MISSION ® RNAi 総合カタログ)をダウンロードする

Rnai実験の基礎　Shrna レンチウイルスによるノックダウン | M-Hub（エムハブ）

A10 VenusはEYFPのVariantで、理研BSIの宮脇敦史先生により開発されました(Nat Biotechnol 20: 87-90, 2002)。細胞にもよりますが、VenusはEGFPやEYFPよりも数倍から10倍くらい明るく、蛍光顕微鏡やFACSではEGFPと全く同様に扱えます。IRESベクターでは、IRESの下流の遺伝子の発現がかなり低くなりますので、Venusを使用することをお勧めします。 Q11 導入遺伝子の発現レベルが低いのですが。 A11 レンチウイルスベクターでは、組み込んだ遺伝子の発現に内部プロモーターを使用するので、標的細胞において高発現のプロモーターを内部プロモーターとして使用することが重要です。CMV、EF-1α、UbC、CAGプロモーター等での比較や、組織特異的なプロモーターの使用をご検討下さい。 また、遺伝子導入効率が悪い場合には、細胞毒性のでない範囲でMOI(multiplicity of infection)を上げて下さい。 Q12 レンチウイルスベクターによるsiRNAの発現レベルは? A12 レンチウイルスベクターは、レトロウイルスベクターもそうですが、single integrationですので、発現量があまり高くないのが問題となります(H1またはU6 promoter)。したがって、endogenousのtarget geneの発現量が多い場合には、ノックダウンの効果が弱くなります。MOIを上げてmultiple integrationにすることによりある程度解決しますが、やはり発現プラスミドのtransient transfectionに比べると弱いようです。また、3'LTRにsiRNA発現unitを挿入したベクター(コピー数が2になります)でも、基本的にあまり効果は変わりません。いずれにしても、よく利くtarget siteを選ぶことは重要です。 Q13 マクロファージへの遺伝子導入効率が悪い A13 第3世代packaging plasmidでは、vpr欠損のため、マクロファージへの遺伝子導入効率が他の細胞と比べて1桁近く下がります。vprを含むすべてのaccessory geneの入ったpackaging plasmidを使用するか、MOIを上げることにより解決されると思います。また、マクロファージで高発現のプロモーターを内部プロモーターとして使用することも重要です。 (MAN0034j) 2021.

組換えレンチウイルスを用いた標的細胞への遺伝子導入（トランスダクション）例：Protocols｜タカラバイオ株式会社

カチオン性ポリマー。比較的安価なトランスフェクション試薬。 もともと、 24μlと現在の半分の量で最初は教えてもらいました。 しかしウイルスタイターが悪く、 2倍にしてみたところ、タイターがよくなったような気がした ため、それ以降は48μlでやっております。 ※その他レンチウイルス作成に必要なもの ①パッケージングプラスミド(今回はpCAG-HIVgp) ② エンベロープ 糖タンパク質をコードするプラスミド (VSV-G=水疱性 口内炎 ウイルスなど 今回もVSV-G) ③目的のプラスミド(SIN=Self inactivating ベクター プラスミド) 上記混合液を室温で15-20分放置。 混合液を ピペット マンでぴペッティングした後に、ディッシュに均一に播く。 37℃インキュベーション 48時間 ウイルス含有培養上清を50mlシリンジなどで回収。0. 45μmフィルターを通して別シリンジへ。 必要に応じて保存or遠心濃縮。 最初にウイルスを作成したときはとてもタイターが低かったのですが、なぜか繰り返しているうちに、だんだんと安定したタイターが得られるようになってきたような気がします。ウイルスタイターについてはまたどこかで書きたいと思っています。 今回は以上です。

Lentivirus Vector レンチウイルスベクター レンチウイルスベクターについて レンチウイルスベクター Plasmidリスト プロトコールとQ&A プロトコール Lentiviral Vector Preparation (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Lentiviral Vector for Inducible RNAi (pdf) [ in English / in Japanese] Transduction of Human Hematopoietic Stem Cells (Miyoshi, H. Gene delivery to hematopoietic stem cells using lentiviral vectors. Methods Mol. Biol. 246:429-38, 2004. PMID: 14970608) レンチウイルスベクターQ&A (三好浩之博士による) レンチウイルスベクター全般に関しましては、以下の総説をご参考下さい。 三好浩之:レンチウイルスベクター 最新医学 幹細胞研究の最近の進歩(最新医学社)Vol. 64 (3月増刊号), 232-242 (2009). 三好浩之:レンチウイルスベクター バイオ医薬品の開発と品質・安全性確保(エル・アイ・シー), 612-625 (2007). 三好浩之:蛍光タンパク質遺伝子導入法 レンチウイルスベクターによる導入 バイオテクノロジージャーナル(羊土社)7, 97-105 (2007). 三好浩之:遺伝子導入法(レンチウイルスベクター) 実験医学(別冊) 免疫学的プロトコール(羊土社), 127-137 (2004). 三好浩之:レンチウイルスベクターを用いた造血幹細胞への遺伝子導入 ウイルス Vol. 52, 225-231 (2002). 三好浩之:レンチウイルスベクターによる非分裂細胞への遺伝子導入 細胞工学(秀潤社) Vol. 20, 1234-1242 (2001). 作製方法については、まず日本語のプロトコールをご覧下さい。 レンチウイルスベクターの遺伝子組換え実験レベルについては、「 レンチウイルスベクターについて 」をご覧下さい。 Q1 ベクターに挿入できるインサートの大きさはどれくらいまででしょうか?

転校したのかな つーか次スレは?って思ったけどこの過疎っぷりじゃ建てても すぐ落ちそうだな。 >>990 あたりでも大丈夫そうだな いつ立てても保守らなきゃ落ちるよ 1001 1001 Over 1000 Thread このスレッドは1000を超えました。 新しいスレッドを立ててください。 life time: 170日 23時間 57分 28秒 1002 1002 Over 1000 Thread 5ちゃんねるの運営はプレミアム会員の皆さまに支えられています。 運営にご協力お願いいたします。 ─────────────────── 《プレミアム会員の主な特典》 ★ 5ちゃんねる専用ブラウザからの広告除去 ★ 5ちゃんねるの過去ログを取得 ★ 書き込み規制の緩和 ─────────────────── 会員登録には個人情報は一切必要ありません。 月300円から匿名でご購入いただけます。 ▼ プレミアム会員登録はこちら ▼ ▼ 浪人ログインはこちら ▼ レス数が1000を超えています。これ以上書き込みはできません。

湊あくあ (みなとあくあ)とは【ピクシブ百科事典】

07/24 01:05 【画像】テイルズシリーズさん、ギャルゲーと化す カンダタ速報

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No. 213 ホワイトラビット ブラックキャット グレーフォックス Customize 体力 300 % 甲信越の雪景色 攻撃力 300 % 関東のカリスマ 再生産F 300 % 中国の伝統 再生産F Lv 20 + 10 研究力 コスト 第 2 章 基準(第1~3章) CustomizeLv Lv 30 + 0 一括変更 No. 213-1 ホワイトラビット Ver4. 2追加 5 超激レア 体力 48, 960 2880 KB 6 攻撃頻度F 282 9. 40秒 攻撃力 33, 660 1980 速度 11 攻撃発生F 43 1. Pickup - だめぽアンテナ. 43秒 CustomizeLv Lv 30 + 0 DPS 3, 581 射程 465 再生産F 4246 4510 141. 53秒 MaxLv + Eye Lv 50 + 70 範囲 範囲 コスト 5, 325 3550 特性 対 赤い敵 エイリアン 100%の確率 で140~168F動きを遅くする ※ お宝で変動 1980 0 0 33660 0 0 解説 秘密警察「ラビッツ」のメンバーである彼女は 検挙率100%のおとり捜査で有名なコスプレ刑事 エイリアンと赤い敵の動きを必ず遅くする(範囲攻撃) 開放条件 逆襲の英雄ダークヒーローズガチャ レッドバスターズガチャ 正月めでたいガチャ 7周年記念ガチャ ウルトラセレクション 2019忘年会ガチャ 超ネコ祭ガチャ プラチナガチャ 極ネコ祭ガチャ 超極ネコ祭ガチャ レジェンドガチャ にゃんコンボ タイホしちゃうぞ☆ 特性 「動きを遅くする」 効果時間+10%上昇(未来編 第3章 クリア) 「 ホワイトラビット 」「 にゃんこ囚人 」 心がぴょんぴょん 特性 「動きを遅くする」 効果時間+10%上昇(未来編 第2章 クリア) 「 ホワイトラビット 」「 ネコなわとび 」 タグ 赤い敵用 エイリアン用 遅くする ガチャ No. 213-2 ブラックキャット Ver4. 53秒 MaxLv + Eye Lv 50 + 70 範囲 範囲 コスト 5, 325 3550 特性 対 赤い敵 エイリアン めっぽう強い(与ダメ x1. 5~1. 8 被ダメ 1/2~1/2. 5) ※ お宝で変動 1980 0 0 33660 0 0 解説 暗殺黒猫団「キャッツ」のメンバーでもある彼女は 決して足跡を残さない華麗なる殺し屋であり運び屋 エイリアンと赤い敵にめっぽう強い(範囲攻撃) 開放条件 ホワイトラビット Lv10 にゃんコンボ 暗殺者コンビ 敵を倒した時に貰えるお金+10%上昇(未来編 第3章 クリア) 「 ブラックキャット 」「 ネコずきんミーニャ 」 タグ 赤い敵用 エイリアン用 めっぽう強い No.

レス数が1000を超えています。これ以上書き込みはできません。 1 名無しんぼ@お腹いっぱい (ワッチョイW f339-u9iy) 2021/02/01(月) 23:00:30. 90 ID:IzIX9xpf0! extend:checked:vvvvv:1000:512! extend:checked:vvvvv:1000:512! extend:checked:vvvvv:1000:512! extend:checked:vvvvv:1000:512 スレを立てる際に「!